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La presencia de citocinas en el medio a MEM (medio osteoclastogénico , a MEM +) induce la diferenciación de OCLs . Sin embargo, la adición de MA inhibe esta diferenciación ( 25 % MA+) tanto si el MA está en contacto con las OCPs desde el inicio del experimento (a) como si se añade al cultivo tras 4 días de diferenciación (b) . *p< 0 ,05 vs ⍺ MEM+ tras análisis por Kruskal Wallis . N= 5 . CONCLUSIONES % de viabilidad celular 150 0 100 50 a) En el d 0 , la ausencia de citocinas osteoclastogénicas disminuye significativamente la viabilidad celular de los OCPs ( a MEM – ), mientras que la presencia de MA es capaz de revertir este efecto ( 25 % MA – ) b) Es interesante señalar que el cultivo con medio osteoclastogénico ( α MEM+) durante 4 días permite mantener la viabilidad celular en cualquiera de las condiciones estudiadas . *p< 0 ,05 vs ⍺ MEM+ tras análisis por Kruskal Wallis . N= 5 . Marta Marín 1 , Isabel Guillén 1,2 , María José Alcaraz 2 , Guillem Ruvira 1 , María Dolores Pérez – Del – Caz 3 , Lidia Ibáñez 1 1 Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Cardenal Herrera -CEU, 46115 -Alfara del Patriarca, Valencia, España. 2 IDM -Universidad Politécnica de Valencia y Universidad de Valencia, Valencia, 46100 -Burjasot, Valencia, España. 3 Unidad de Quemados y Cirugía Plástica, Hospital Universitario y Politécnico La Fe, 46026 -Valencia, España. INTRODUCCION Estudiar el efecto del secretoma de las ASCs sobre la viabilidad y la capacidad osteoclastogénica de las células progenitoras de OCLs ( OCPs ) . Estudio in vitro del efecto del secretoma de las células madre mesenquimales de tejido adiposo sobre las células progenitoras de osteoclastos 1. Lavoie JR and Rosu -Myles M (2013 ).Biochimie 95 :2212 -2221 . 2. Baraniak PR and McDevitt TC (2010 ).Regen Med 5 :121 -143 . 3. Wu L, Leijten JC et al .(2011 ).Tissue Eng Part A 17 :1425 -1436 . Este trabajo ha sido financiado por las AYUDAS A GRUPOS DE INVESTIGACIÓN PRECOMPETITIVOS CEU – BANCO SANTANDER 2018 ‐19 (FUSPBS -PPC 07 / 2018 ) Nuestros resultados parecen indicar que el secretoma de las ASCs tiene un doble papel protector, bloqueando la osteoclastogénesis y aumentando la viabilidad celular en ausencia de citocinas osteoclastogénicas . Sin embargo, son necesarios más ensayos para comprender este posible papel regulador del secretoma de ASCs sobre celularidad ósea . Nº OCLs / pocillo Figura 1 . Cuantificación de OCLs por tinción TRAP 300 0 200 100 Nº OCLs / pocillo b) d4 300 0 200 100 % de viabilidad celular 150 0 100 50 Las células madre mesenquimales (MSC) han demostrado tener un potencial regenerativo, antiinflamatorio e inmunomodulador mediado por los efectos paracrinos de distintos componentes 1 . La composición y el efecto de este secretoma o medio acondicionado (MA) depende de numerosos factores, entre ellos el origen de las células que lo producen . A nivel osteoarticular, el secretoma de las MSC de tejido adiposo ( ASCs ) es capaz de aumentar la síntesis de la matriz extracelular y de disminuir la senescencia de condrocitos y osteoblastos osteoartríticos 2 ,3 . Sin embargo, existen pocos datos de los efectos de este secretoma sobre los osteoclastos ( OCLs ) . a) d0 a) d0 b) d4 Figura 2. Viabilidad celular de los OCLs por el ensayo del MTT 1. Obtención del secretoma o MA MA DMEM/HAM F12 1% PS 10% suero humano 37ºC 48h ASCs 3. Cultivo de OCPs y obtención de OCLs d0: d0 OCP s ± 25% MA TRAP MTT d6 -d7 RANKL ( 50 ng / mL ) / MCSF (25 ng / mL ) (+) o sin citocinas ( – ) (medio osteoclastogénico ) d4: TRAP MTT d6 -d7 d0 OCP s d4 OCPs ± 25% MA RANKL ( 50 ng / mL ) / MCSF (25 ng / mL ) (+) o sin citocinas ( – ) (medio osteoclastogénico ) OBJETIVOS MATERIAL Y METODOS RESULTADOS BIBLIOGRAFIA AGRADECIMIENTOS 2. Obtención de OCPs Células mononucleares Fycoll -Paque® Buffy coat Humano 37º (2h) OCPs RPMI + 10% SBF + 1% PS * * * * a MEM + a MEM +